抑菌效力试验的菌悬液制备、接种及结果评价

2016-06-27

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抑菌效力试验

9728太阳集团首页抑菌效力试验服务

抑菌效力方法开发（样品量 20g/批，一个批次）
抑菌效力方法验证(样品量 80g/批，三个批次)
抑菌效力测试(3 个批次产品，样品量 40g/批)

注：抑菌效力试验费用根据具体项目评估确定。

菌种

抑菌效力测定所用菌种见表1。在特定情况下，亦可选用制剂中常见的污染微生物作为试验菌株。

表1：培养基适用性检查、方法适用性试验及抑菌效力测定所用试验菌的培养条件。

培养基条件

菌悬液的制备

新鲜菌体培养条件见表1。铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌若为琼脂培养物，加入适量的 0.9%无菌氯化钠溶液将琼脂表面的培养物洗脱，并将菌悬液移至无菌试管内，然后用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗并制成每1ml含菌数约为 10⁸ CFU的菌悬液。

若为液体培养物，离心收集菌体，用 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗并制成每1ml含菌数约为10⁸ CFU的菌悬液。

取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml 含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，加入适量的含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数 10⁸ CFU的孢子悬液。测定1ml菌悬液中所含的菌数。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在 2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉的孢子悬液可保存在2～8℃，在 1 周内使用。

供试品接种

抑菌效力试验结果可能受试验容器特性的影响，包括容器的材质、形状、体积及封口方式等。因此，只要供试品每个包装容器的装量足够试验用，同时容器便于按无菌操作技术接入试验菌液、混合及取样等，一般应将试验菌直接接种于供试品原包装容器中进行贮存。若因供试品的性状或每个容器装量等因素需将供试品转移至无菌容器时，该容器的材质不得影响供试品的特性（如吸附作用），特别应注意不得影响供试品的pH，pH 对抑菌剂的活性影响很大，同时容器的口径大小应便于供试品的转移及混匀。

取包装完整的供试品至少5份，直接接种试验菌，或取适量供试品分别转移至5个适宜的无菌容器中（若试验菌株数超过 5 株，应增加相应的供试品份数），每一容器接种一种试验菌，1g或1ml供试品中接菌量为10⁵～10⁶ CFU，接种菌液的体积不得超过供试品体积的 1%,充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布，然后置 20～25℃避光贮存。